Vantaggi e svantaggi di Western Blot

Western Blot , una tecnica analitica utilizzata per individuare una proteina specifica in un dato campione , impiega la capacità di un enzima o di anticorpo primario fluorescenza marcato di legarsi al suo antigene specifico . Si tratta di un processo in tre fasi che inizia con elettroforesi su gel , seguito da membrana blotting e sondare con gli anticorpi . Individuazione di proteine ​​può essere diretto o indiretto , con quest'ultimo utilizzando un anticorpo secondario marcato diretto contro il primario . Anche se accettato come una tecnica di analisi delle proteine ​​di routine , western blot ha dei limiti e vantaggi . Vantaggio : Sensibilità

Uno dei maggiori argomenti a favore di macchia occidentale è la sua sensibilità . A causa della sua capacità di rilevare un minimo di 0,1 nanogrammi di proteine ​​in un campione , la tecnica può teoricamente servire come strumento diagnostico precoce efficace , sentendo anche la minima risposta immunogenico da un virus o batteri in un campione del paziente . Un western blot indiretta ulteriore basa su questa sensibilità dalla capacità del anticorpo secondario per amplificare l'intensità del segnale rilevato dal sistema di imaging . Maggiore sensibilità significa che un minor numero di anticorpi sono necessari per i test , che riduce in modo significativo i costi di laboratorio
Vantaggio : . Specificità

La tecnica Western Blot deve la sua specificità di due grandi contribuisce fattori. In primo luogo , elettroforesi su gel ordina un campione in proteine ​​di diversa dimensione , carica , e la conformazione . Questo processo di per sé è un enorme passo verso rilevamento , come bande formate nel gel già forniscono indizi circa le dimensioni della proteina o polipeptide di interesse . La specificità di interazione anticorpo - antigene serve come secondo fattore importante. Perché anticorpi specifici mostrano affinità per proteine ​​specifiche , il processo può rilevare selettivamente una proteina bersaglio , anche in una miscela di 300.000 proteine ​​diverse
Svantaggi : . Incline a risultati falsi o soggettivi

nonostante la sua sensibilità e specificità , una macchia occidentale può ancora produrre risultati errati . A risultati falsi - positivi quando un anticorpo reagisce con una proteina non previsto , che è ciò che accade spesso quando un paziente in fase di test per l'HIV succede di avere la tubercolosi o un numero di infezioni parassitarie . Un falso negativo , d'altro canto , può facilmente causare proteine ​​più grandi non abbiano il tempo sufficiente per trasferire correttamente alla membrana . Blotting e lavorazione impropria spesso producono distorta , sbiadito , o anche più bande , rendendo i risultati dei test soggette all'interpretazione del tecnico
Svantaggi : . Costo elevato e la domanda tecnica

Il costo di un Western Blot è un composto di grandi spese individuali per gli anticorpi marcati , analisti specializzati e attrezzature di laboratorio . Un processo delicato , western blotting richiede precisione in ogni passo per la corretta identificazione dei componenti di un campione . Un errore minore concentrazione del reagente o nel periodo di incubazione può essere disastroso per l'intero processo . Infine , le attrezzature necessarie per il rilevamento e l'imaging - chemiluminescenza , fluorescenza , radioattivo , o sistemi di rilevamento laser - può essere troppo costoso per l'unità media microbiologia

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