Come trovare il pH del citoplasma

potenziale di idrogeno , o pH , è una misura della acidità o alcalinità di un liquido . E ' importante in molti campi , tra cui biologia, chimica e scienze ambientali . PH misura è semplice nella maggior parte delle situazioni . Cartina tornasole può essere inserita nel liquido , e il cambiamento di colore della carta identifica il grado in cui il fluido è acido o base . Nei casi in cui il fluido da testare è all'interno di una cella , altri metodi devono essere devised.Things che ti serviranno
2 ' , 7' -bis - ( 2 = carboxyethyl ) -5 ( e -6 ) - carbossifluoresceina ( BCECF ) , o altra sostanza che è diversa fluorescenza in diverse condizioni di pH
fluorescenza spettrofotometro con doppi monocromatori , o uno strumento simile per la misurazione della fluorescenza
Centrifuga
curve di calibrazione predeterminata misura correlazione di BCECF intracellulare e pH citoplasmatico

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raffreddare la temperatura del campione cellula di 41-50 gradi Fahrenheit Altre istruzioni
. Questo permette un migliore tasso di assorbimento del materiale fluorescente dalle cellule .
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Caricare il campione cellulare con una fluorescenza indurre sostanza come BCECF . Questo viene fatto aggiungendo la BCECF al mezzo cella , poi mescolando delicatamente la miscela per 2,5 ore . Il BCECF viene assorbito attraverso la membrana permeabile delle cellule .
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separare le cellule dal mezzo e ogni BCECF assorbito eseguendo il campione attraverso una centrifuga . Mettere le cellule in un contenitore separato .
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Riscaldare il campione cellulare di 98,6 gradi Fahrenheit per 30 minuti , a ravvicinare le condizioni all'interno del corpo umano . Se le cellule in esame normalmente vivono in un altro ambiente che il corpo umano , regolare il campione alla temperatura appropriata .
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Excite campione cellulare mediante agitazione . Questo contribuisce ad aumentare l'attività fluorescente .
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Misurare intensità fluorescente del campione cellulare utilizzando lo spettrofotometro . Per ottenere i migliori risultati , utilizzare la luce a lunghezze d'onda di eccitazione di 500-510 nanometri . A queste lunghezze d'onda , vi è una maggiore diffusione di intensità fluorescente , così è più facile per differenziare i risultati . L' intensità della fluorescenza viene misurata in unità fluorescenti relativi ( RFU ) , il rapporto tra la luminosità della sostanza in uno stato eccitato , fluorescente al suo normale stato non eccitato . Più alta è la RFU , la più luminosa la sostanza , in confronto al suo stato normale .
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Confrontare i risultati spettrofotometro pre - disegnato curve di calibrazione . In generale , maggiore fluorescente significa maggiore pH all'interno del campione . Con una lunghezza d'onda di eccitazione di 510 nm , una sostanza con un pH di 6,4 mostrerebbe una RFU di circa 20 , mentre una sostanza con un pH di 9.9 mostrerebbe una RFU di circa 55 .