Come identificare Gram positivi

Dal 1880 , il test di colorazione di Gram rimane un importante metodo di identificazione batterica e classificazione . Microbiologi spesso eseguono il test Gram come il primo passo per identificare particolari tipi di batteri a forma di bastoncello dal genere Bacillus . Colorazione di Gram è chiamato per il suo inventore , batteriologo danese Hans Christian Gram . La tecnica funziona a causa di una differenza di gram positivi e gram negativi fisiologia parete cellulare batterica . Alcuni aste gram-positivi causano malattie gravi come l'antrace e tetanus.Things che ti serviranno
abiti da laboratorio
Guanti
Scarpa rivestimenti
Pentola a pressione
batteri colonia
Agar
Petri piatti
Acqua
inoculazione ciclo
vetrino
Methanol
becco Bunsen
macchia viola di cristallo
iodio macchia reagente
Decolorizer
safranina
soluzione di fucsina
carta assorbente
microscopio

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1

Fissare l'uso di una asettica spazio laboratorio pulita per condurre il test colorazione di Gram . Indossare laboratorio indumenti puliti e rivestimenti di scarpe per evitare la contaminazione . Utilizzare guanti e una mascherina quando si maneggia colture batteriche . Isolare una colonia di bacilli per il test e crescere su agar ricco di sostanze nutritive in capsule di Petri . Sterilizzare le piastre di Petri e agar con una pentola a pressione prima di utilizzare .
2

Aggiungere qualche goccia di acqua pulita al piatto cultura . Distribuire uniformemente su agar . Trascinare un ciclo inoculazione leggermente sulla superficie del agar . Trasferire il campione su un vetrino pulito e spalmare uniformemente in un'area circolare delle dimensioni di una monetina . Mantenere la dimensione del campione minimo; si dovrebbe essere a malapena in grado di vedere ad occhio nudo.
3

Applicare il 95 per cento di metanolo nel striscio vetrino per due minuti per fissare le cellule e di evitare distorsioni della loro morfologia . Far asciugare il vetrino o riscaldare delicatamente su una bassa fiamma del bruciatore Bunsen . Spostare il cursore avanti e indietro per riscaldare in modo uniforme ed evitare punti caldi localizzati . Applicare il calore in modo uniforme e coerente . Evitare di prendere la slitta della fiamma fino a quando hai finito riscaldandolo .
4

Versare cristallo viola macchia reagente sul vetrino fisso . Lasciate riposare per 30 a 60 secondi . Lavare la macchia con acqua corrente per alcuni secondi . Scolare l'acqua in eccesso dalla diapositiva . Coprire il vetrino con il reagente macchia di iodio per 30 a 60 secondi. Lavare lo iodio con acqua di rubinetto . Inclinare il vetrino e aggiungere qualche goccia di decolorante . Applicare fino a quando il deflusso è pulito. Lavare il vetrino .
5

Bagnare il vetrino con colore rosa safranin reagente contro- colorazione per 30 secondi . Si può sostituire la soluzione di fucsina di base per la safranina . Lavare delicatamente il vetrino e agitare l'acqua in eccesso . Tamponare asciugare con carta assorbente e poi l'aria asciugare il vetrino . Esaminare il vetrino preparato sotto un microscopio dotato di una sorgente luminosa. Cercare e identificare i batteri gram positivi aste con colorazione blu o viola dalla prova colorazione di Gram .