Metodi per un lievito Three Hybrid System

Replica dei cromosomi , trasformazione RNA messaggero , traduzione di proteine ​​, e le decisioni critiche nelle prime fasi di sviluppo dipendono dall'interazione di DNA , RNA e proteine ​​. Queste interazioni sono i processi biologici fondamentali di espressione genica e sintesi proteica . Gli scienziati usano spesso Saccharomyces cerevisiae , della stessa specie di lievito utilizzato nella cottura e birra , per studiare i geni che codificano per proteine ​​specifiche e analizzare le interazioni tra proteine ​​ed altre molecole . Il sistema a tre ibridi di lievito è una delle tre varianti del sistema del doppio ibrido in lievito usato per studiare queste interazioni . Il sistema doppio ibrido

Il metodo del doppio ibrido viene utilizzato per rilevare le interazioni proteina-proteina , cercando per l'espressione di un gene reporter . Molte proteine ​​hanno almeno due domini o unità strutturali e funzionali distinte . GAL4 , una proteina presente in Saccharomyces cerevisiae , ha un dominio di legame al DNA ( DBD ) e un dominio di attivazione (AD ) . In questo metodo , una proteina ibrida è fuso al DBD e una seconda alla AD . Nessuna gene reporter è espresso dalla fusione di solo uno degli ibridi . Dato che il gene GAL4 giornalista è espresso solo quando sono presenti entrambi gli ibridi , è indicato interazione proteina-proteina .
Il sistema Three- Hybrid

Il metodo identifica tre ibride un gene reporter per rilevare l'interazione della proteina con RNA . La prima proteina ibrido costituito da un DBD fuso direttamente a un dominio di legame dell'RNA . Il secondo consiste nella AD del fattore GAL4 di trascrizione legata ad una proteina di legame dell'RNA . I domini di legame dell'RNA interagiscono con una molecola di RNA ibrido che lega le due proteine ​​ibride per formare un complesso . Formazione del complesso innesca l'espressione del gene reporter di GAL4 . Poiché il gene reporter è acceso soltanto dalla formazione del complesso tre ibrido , la sua presenza indica l'interazione di RNA e proteine ​​.
Il sistema One - Hybrid

il metodo one- ibrido viene utilizzato per rilevare l'interazione di proteine ​​con il DNA . Un sistema unico ibrido fonde una singola proteina , che collega l' AD direttamente al DBD . Invece di identificare un gene reporter , questo metodo cerca una proteina specifica che deve riconoscere una sequenza bersaglio di DNA . La presenza della proteina specifica indica l'interazione di proteine ​​con il DNA .
Il sistema a doppio ibrido

Il metodo uno-due ibrido è utilizzata per studiare proteina- proteina e proteina-DNA interazioni contemporaneamente. Utilizzando ceppi di lievito di nuova concezione , questo metodo impiega il gene GAL4 reporter per identificare le interazioni proteina-proteina e un consenso p53 per identificare interazioni proteina -DNA . Il metodo dovrebbe aumentare sensibilmente la precisione dei risultati sperimentali , riducendo l'insorgenza di falsi positivi ottenuti in altri sistemi ibridi .